El colesterol transportado por las lipoproteínas de alta densidad (HDL) a menudo se denomina "colesterol bueno", ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.
Principio del método
Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y baja densidad (LDL) del suero o plasma, se precipitan con fosfotungstato en presencia de iones de magnesio. Tras la centrifugación, el sobrenadante contiene lipoproteínas de alta densidad (HDL). La fracción de HDL colesterol se determina utilizando el reactivo enzimático de colesterol total.
Materiales
- Tubos eppendorf
- Tubos de ensayo
- Cubetas de espectrofotómetro
- Gradillas
- Pipetas automáticas
- Reactivo precipitante (R)
- RT (reactivo del colesterol)
- CHOLESTEROL CAL
- Baño maría
- Centrífuga
- Espectrofotómetro
Procedimiento
1. Pipetear en un tubo eppendorf:
100 microlitros R+1,0 mL de muestra.
2. Mezclar y dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Centrifugar 2 minutos a 12000 rpm y recoger el sobrenadante. Este sobrenadante se utilizará como muestra de aquí en adelante.
4. Pipetear en tres tubos de ensayo:
Blanco: 1,0 mL RT
Patrón: 1,0 mL RT + 10 microlitros cholesterol cal
Muestra: 1,0 mL RT + 10 microlitros muestra
5. Mezclar e incubar a 37ºC en baño maría.
6. Leer la absorbancia del patrón y de la muestra a 505 nm en el espectrofotómetro.
Resultados
Patrón: 0,769A
Muestra: 0,132 A
Conentración Colesterol HDL= (0,132A/0,769A)x200 mg/dL= 34,33 mg/dL
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