La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del hígado, las células del músculo esquelético y en menos cantidad en otros tejidos.
Aunque un nivel elevado de AST en suero no es específico de enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y seguimiento, junto con otras enzimas como la ALT y ALP. También se utiliza en el control post - infarto, en pacientes con desordenes del músculo esquelético, y en otras afecciones.
Principio del método
La aspartato aminotransferasa (AST) inicialmente llamada transaminasa glutamato oxaloacética (GOT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato del alfa - cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH.
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinada fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de AST en la muestra ensayada.
Materiales
- RT = Disolver un comprimido de R2 en un vial de R1
- Cubetas de espectrofotometría
- Tubos eppendorf
- Pietas automáticas
- Pinzas
- Suero
- Tubo
- Gradillas
- Espectrofotómetro
Procedimiento
1. Ajustar el espectrofómetro según los parámetros de esta medida:
- Longitud de onda: 340 nm
- Factor: 1750
- Tiempo de incubación: 60 segundos
- Temperatura de trabajo: 37ºC
- Tiempo de espera entre lecturas: 60 segundos
- Nº de intervalos: 3
2. En un tubo eppendorf pipetear 1 ml RT + 100 microlitros de muestra. Transpasarlo a una cubeta y empezar la medida.
Resultados
- Absorbancia 1: 1,550 A
- Absorbancia 2: 0, 294 A
- Absorbancia 3: 0, 329 A
- Absorbancia 4: 0, 285 A
- Concentración: 778,7 U/L
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