Las lipoproteínas son grandes moléculas localizadas en e plasma. Están constituidaas por proteínas asociadas a fosfolípidos, triglicéridos o colestrol mediante enlaces iónicos o fuerzas de Van de Waals. El estudio de lipoproteínas es útil para el diagnóstico, tratamiento y seguimiento de los trastornos metabólicos de lípidos.
Principio del método
Las lipoproteínas se clasifican según su migración electroforética, durante el curso de la cual se separan en varias fracciones distintas que, de menor a mayor movilidad, se denominan quilomicrones, B-lipoproteínas o LDL, pre-B-lipoproteínas o VLDL, a-lipoproteínas o HDL y pre-a-lipoproteínas.
La electroforesis de lipoproteínas sobre acetato de celulosa es de realización delicada, pues el colorante se fija químicamente sobre el soporte. Para evitar este inconveniente, se efectúa una hidrólisis en solución alcalina. El cellogel hidrolizado pierde su carácter lipofílico y se decolora perfectamente. Durante el desarrollo de la hidrólisis, las lipoproteínas no se alteran en absoluto.
Materiales
- Alimentador para electroforesis
- Cubeta para electroforesis
- Aplicador para la muestra
- Tiras de Cellogel
- Papel de filtro
- Láminas Mylar
- Pipetas automáticas
- Pinzas
- Bandejas
- Placas de vidrio
- Estufa de 80ºC
- Fotodensitómetro
- Tampón (Tris-Hipurato)
- Colorante Negro Sudán A
- Colorante Negro Sudán B (NaOH al 5%)
- Solución transparentadora
Procedmiento
1. Preparar el tampón: Añadir 100 mL de Tris-Hipurato concentrado en un litro de agua destilada.
2. Preparar las tiras de Cellogel: Introducir las tiras en tampón durante 10 minutos.
3. Preparar la cubeta de electroforesis: Llenar la cubeta con tampón por igual a ambos lados.
4. Secar las tiras eliminando el exceso de tampón entre dos hojas de papel de filtro y colocarlas en el puente. A continuación se aplica el suero en las tiras con ayuda de un aplicador (3 veces).
5. Cubrir la cubeta y dejar que migre durante 35 minutos a 200V.
6. Teñir: Mezclar 50 mL de Negro Sudán A con 50 mL de Negro Sudán B. Sumergir la tira en la disolución de tinción durante 45 minutos. Agitar suavemente.
7. Decoloración: Extraer la tira del baño de tinción y sumergirla en agua durante 1 minuto.
8. Transparentado: Sumergir la tira en la solución transparentadora durante un minuto. Tras eso, poner la tira en una lámina Mylar y secar el exceso de líquido. Llevarla a una estufa de 80ºC hasta que la tira se vuelva semitransparente.
9. Introducirla en agua y colocar una lámina Mylar por encima. La escaneamos y leemos el resultado con el programa adecuado.
Resultados
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