La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas. Se forma en el hígado a partir de su destrucción. Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales.
Principio del método
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco y anhidrido carbónico.
Los iones amonio reaccionan con silicato e hipoclorito (ClONa), en presencia del catalizador nitroprussiato, para formar un indofenol verde.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.
Materiales
- Tubos de ensayo
- Pipetas automáticas
- Cubetas de espectrofotómetro
- Gradillas
- RT (R1+R3)
- R2
- UREA CAL (50 mg/dL)
- Suero
- Espectrofotómetro
- Baño maría
Procedimiento
1. Disolvemos una pastilla R3 en un frasco R1 para formar el RT.
2. Pipeteamos en 3 tubos:
Blanco: 1,0 mL RT
Patrón: 1,0 mL RT + 10 microlitros patrón
Muestra: 1,0 mL RT + 10 microlitros suero
3. Mezclamos e incubamos 5 minutos a 37ºC en el baño maría.
4. Añadimos 1,0 mL de R2 en todos los tubos.
5. Volvemos a incubar 5 minutos a 37ºC.
6. Leemos la absorbancia a 580 nm.
Resultados
Patrón: 0,377 A
Muestra: 0,417 A
Concentración urea = (0,417 A/0,377 A)*50 mg/dL= 55,31 mg/dL
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