La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:
- Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyeticas, presencia de drogas.
- Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.
Principio del método
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, sólo la primera reacciona en medio acuoso (directa) precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione (indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la bilirrubina directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.
Materiales
- Tubos de ensayo
- Pipetas automáticas
- Cubetas de espectrofotómetro
- Gradillas
- R1
- R2
- Suero
- Espectrofotómetro
- Baño maría
Procedimiento
1. Pipetear en una cubeta:
Blanco: 1,5 ml R1 + 100 microlitros suero
Muestra: 1,5 ml R1 + 50 microlitros R2 + 100 microlitros suero
2. Incubar 5 minutos y leer la absorbacia de cada uno a 555 nm.
Blanco = 0,041 A
Muestra = 0,116 A
[Bilirrubina directa] = (0,116 A - 0,041 A) x 14 mg/dl = 1,05 mg/dl
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