Fosfatasa ácida

Significado clínico

Las fosfatasas ácidas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente altas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y plaquetas.
Niveles elevados de de fosfatasas ácidas se encuentran en alteraciones prostáticas como hipertrofia, prostatitis o carcinoma, en enfermedades hematológicas, óseas o hepáticas.

Principio del método

La fosfatasa ácida a pH 5 hidroliza el alfa - naftilfosfato o fosfato inorgánico a alfa - naftol.
El alfa - naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto coloreado.

Materiales

• RT = Disolver un comprimido de R2 en un vial de R1
• R3
• R4 (ácido acético)
• Cubetas de espectrofotometría
• Tubos eppendorf
• Pietas automáticas
• Pinzas
• Suero
• Tubo
• Gradillas
• Espectrofotómetro

Procedimiento

1. Como la fosfatasa ácida en suero es muy inestable, estabilizar mediante la adición de 50 microlitros de R4 por cada mL de muestra. (200 microlitros muestra -> 10 microlitros R4)

2. Ajustar el espectrofómetro según los parámetros de esta medida:

• Longitud de onda: 405 nm
• Factor: 750
• Tiempo de incubación: 300 segundos
• Temperatura de trabajo: 37ºC
• Tiempo de espera entre lecturas: 60 segundos
• Nº de intervalos: 3

3. Pipetear en dos tubos y medir: (no añadir el suero hasta antes de empezar a medir)

ACP total: 1,0 ml RT + 100 microlitros suero

ACP no prostática: 1,0 ml RT + 10 microlitros R3 + 100 microlitros suero

Resultados

ACP total:

• Absorbancia 1: 1,199 A
• Absorbancia 2: 1,272 A
• Absorbancia 3: 1,328 A
• Absorbancia 4: 1,387 A
• Concentración: 47 U/I

ACP no prostática:

• Absorbancia 1: 1,170 A
• Absorbancia 2: 1,175 A
• Absorbancia 3: 1,179 A
• Absorbancia 4: 1,186 A
• Concentración: 4 U/I

ACP prostática = ACP t - ACP no p = 47 U/I - 4 U/I = 39 U/I