La creatina quinasa es una enzima intracelular, distribuida por todo el organismo humano. Su función fisiológica está asociada con adenosina trifosfato (ATP) producida cuando el músculo se contrae.
El nivel de CK en suero está elevado en pacientes con alteraciones del músculo esquelético y en infartos de miocardio.
Principio del método
La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la fosfocreatina al ADP. Esta reacción se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa (HK) y por la glucosa - 6 - fosfato deshidrogenasa (G6F - DH).
La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de CK en la muestra ensayada.
La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de CK en la muestra ensayada.
Materiales
- RT = Disolver un comprimido de R2 en un vial de R1
- Cubetas de espectrofotometría
- Tubos eppendorf
- Pietas automáticas
- Pinzas
- Suero
- Tubo
- Gradillas
- Espectrofotómetro
Procedimiento
1. Ajustar el espectrofómetro según los parámetros de esta medida:
- Longitud de onda: 340 nm
- Factor: 8095
- Tiempo de incubación: 120 segundos
- Temperatura de trabajo: 37ºC
- Tiempo de espera entre lecturas: 60 segundos
- Nº de intervalos: 3
2. Pipetear en un tubo: 1 ml RT + 20 microlitros suero. Transpasar a una cubeta y empezar la medida.
Resultados
- Absorbancia 1: 0,543 A
- Absorbancia 2: 0,571 A
- Absorbancia 3: 0,608 A
- Absorbancia 4: 0,651 A
- Concentración: 292,2 U/L
No hay comentarios:
Publicar un comentario