Test de drogas (nal von minden Drug-Screen)

Significado clínico

Los test rápidos nal von minden Drug-Screen son inmunoensayos competitivos para la determinación cualitativa de varias drogas y sus metabolitos en la orina humana.

Principio del método

La zona de test (T) etecta las drogas que pueden encontrarse en la muestra de orina. La otra es la zona de control (C).

• Cuando el resultado es negativo, una línea rosa aparecerá tanto en la zona de test como en la zona de control.
• Cuando el resultado es positivo solo aparecerá una línea rosa en la zona de control.

Si en la zona de control no puede distinguirse claramente la línea rosa, el test es inválido.

Materiales

• Orina
• Test de drogas

Procedimiento

1. Quitarle el tapón y sumergir las tiras en orina durante 15 segundos sin que el plástico toque la orina. Esperar 5 minutos y leer los resultados.

Resultado

Creatina quinasa

Significado clínico

La creatina quinasa es una enzima intracelular, distribuida por todo el organismo humano. Su función fisiológica está asociada con adenosina trifosfato (ATP) producida cuando el músculo se contrae.
El nivel de CK en suero está elevado en pacientes con alteraciones del músculo esquelético y en infartos de miocardio.

Principio del método

La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la fosfocreatina al ADP. Esta reacción se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa (HK) y por la glucosa - 6 - fosfato deshidrogenasa (G6F - DH).
La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de CK en la muestra ensayada.

Materiales

• RT = Disolver un comprimido de R2 en un vial de R1
• Cubetas de espectrofotometría
• Tubos eppendorf
• Pietas automáticas
• Pinzas
• Suero
• Tubo
• Gradillas
• Espectrofotómetro

Procedimiento

1. Ajustar el espectrofómetro según los parámetros de esta medida:

• Longitud de onda: 340 nm
• Factor: 8095
• Tiempo de incubación: 120 segundos
• Temperatura de trabajo: 37ºC
• Tiempo de espera entre lecturas: 60 segundos
• Nº de intervalos: 3

2. Pipetear en un tubo: 1 ml RT + 20 microlitros suero. Transpasar a una cubeta y empezar la medida.

Resultados

• Absorbancia 1: 0,543 A
• Absorbancia 2: 0,571 A
• Absorbancia 3: 0,608 A
• Absorbancia 4: 0,651 A
• Concentración: 292,2 U/L

Fosfatasa ácida

Significado clínico

Las fosfatasas ácidas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente altas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y plaquetas.
Niveles elevados de de fosfatasas ácidas se encuentran en alteraciones prostáticas como hipertrofia, prostatitis o carcinoma, en enfermedades hematológicas, óseas o hepáticas.

Principio del método

La fosfatasa ácida a pH 5 hidroliza el alfa - naftilfosfato o fosfato inorgánico a alfa - naftol.
El alfa - naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto coloreado.

Materiales

• RT = Disolver un comprimido de R2 en un vial de R1
• R3
• R4 (ácido acético)
• Cubetas de espectrofotometría
• Tubos eppendorf
• Pietas automáticas
• Pinzas
• Suero
• Tubo
• Gradillas
• Espectrofotómetro

Procedimiento

1. Como la fosfatasa ácida en suero es muy inestable, estabilizar mediante la adición de 50 microlitros de R4 por cada mL de muestra. (200 microlitros muestra -> 10 microlitros R4)

2. Ajustar el espectrofómetro según los parámetros de esta medida:

• Longitud de onda: 405 nm
• Factor: 750
• Tiempo de incubación: 300 segundos
• Temperatura de trabajo: 37ºC
• Tiempo de espera entre lecturas: 60 segundos
• Nº de intervalos: 3

3. Pipetear en dos tubos y medir: (no añadir el suero hasta antes de empezar a medir)

ACP total: 1,0 ml RT + 100 microlitros suero

ACP no prostática: 1,0 ml RT + 10 microlitros R3 + 100 microlitros suero

Resultados

ACP total:

• Absorbancia 1: 1,199 A
• Absorbancia 2: 1,272 A
• Absorbancia 3: 1,328 A
• Absorbancia 4: 1,387 A
• Concentración: 47 U/I

ACP no prostática:

• Absorbancia 1: 1,170 A
• Absorbancia 2: 1,175 A
• Absorbancia 3: 1,179 A
• Absorbancia 4: 1,186 A
• Concentración: 4 U/I

ACP prostática = ACP t - ACP no p = 47 U/I - 4 U/I = 39 U/I

Seminograma

Significado clínico

El seminograma está indicado para valorar la capacidad reproductora de un varón. También cuando se realice un estudio postvasectomía, con la intención de comprobar si los espermatozoides han desaparecido totalmente del eyaculado.

Materiales

• Probeta
• Papel indicador de pH
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Pipetas pasteur
• Varilla de vidrio
• Cámara de Neubauer
• Baño termostático
• Microscopio
• Estufa
• Cámara húmeda
• Eosina azulada al 1%
• Nigrosina al 10%
• Formol al 10%
• Bicarbonato sódico
• Panóptico rápido
• Metanol

Procedimiento

1. Vitalidad. Mezclar 50 microlitros de semen con 50 microlitros de eosina azulada, esperar 30 segundos y añadir 100 microlitros de nigrosina al 10%. Agitar y realizar una extensión sobre el porta y observar al microscopio con objetivo de 100x.

Muerto

Vivo

2. Recuento: Añadimos 50 microlitros de semen con 1 ml de solución Macomber-Saunders (5g bicarbonato sódico,1 ml formol + agua hasta 100 ml). Montamos la cámara de Neubauer, incubamos 2 minutos en cámara húmeda y hacemos el recuento en un cuadrante de leucocitos.

79*10*10.000= 7.900.000 espermatozoides/ml

3. Morfología: Realizar una extensión de semen sobre un portaobjetos y dejamos que se seque perfectamente. La fijamos con metanol durante 5 minutos, renovando el metanol cada 1,5 minutos. Teñimos con panóptico rápido y observamos con objetivo de 100x.

Espermatozoides normales: 40%

Espermatozoides anormales: 60%

Inmunodoting para hepatitis autoinmunes

Principio del método

La prueba se basa en el principio del enzimoinmunoanálisis. Cada tira del test está compuesta por una membrana fijada sobre un soporte plástico; en dicha membrana se han dispensado distintos Ag. Durante el desarrollo de la prueba, las tiras se incuban con suero diluido de los pacientes. Si dichos sueros contienen los auto Ac buscados, se unirán específicamente al correspondiente Ag de los fijados en la membrana. Mediante un lavado, eliminaremos el exceso de Ac que no se han unido a sus Ag para, posteriormente, añadir un conjugado de origen caprino marcado con ALP. Dicho conjugado va dirigido contra Ig G/Ig M humanas. El conjugado se une a los complejos Ag-Ac. Después de realizar un segundo lavado con el fin de eliminar el exceso de conjugado, se añade el sustrato que, por acción de la enzima ALP, desarrollará una coloración púrpura en el lugar correspondiente de la membrana. Dicha coloración tendrá una intensidad directamente proporcional a la cantidad de Ac presente en la muestra.

Materiales

• Tampón de lavado
• Tiras dot
• Tampón de dilución
• Conjugado
• Sustrato
• Bandejas de incubación
• Agua destilada
• Pipetas
• Agitador para las bandejas de incubación

Procedimiento

1. Colocar la tira en la bandeja con los puntos azules hacia arriba. Añadir 2 ml de tampón de lavado e incubar 10 minutos.

2. Eliminar el líquido invirtiendo lentamente la bandeja. Añadir 1,5 ml de tampón de dilución + 10 microlitros de muestra en cada canal. Incubar 30 minutos.

3. Eliminar el líquido y lavar tres veces cada canal, durante 3 minutos cada vez con 1,5 ml de tampón de lavado. Agitar durante el lavado. Eliminar el líquido tras cada lavado.

4. Añadir 1,5 ml de conjugado e incubar 30 minutos.

5. Eliminar el líquido y repetir el paso 3. Añadir 1,5 ml de sustrato e incubar 10 minutos.

6. Eliminar el líquido y lavar una vez más para detener la reacción. Extraer las tiras y dejarlas secar en papel absorbente.

Resultados

En este caso se ha coloreado únicamente un punto, correspondiente al control positivo, por tanto la muestra es negativa.