Identificación de proteínas por inmunoelectroforesis

Significado clínico

Separar las proteínas contenidas en un suero e identificar en él la posible presencia de Albúmina e IgG.

Principio del método

La inmunoelectroforesis es una técnica de separación e identificación de sustancias que atraviesa dos fases. Durante la primera fase, separamos las proteínas de la muestra mediante una electroforesis convencional en agarosa. En la segunda fase, se practica un carril o canal paralelo al recorrido electroforético y se rellena con un Ac antiproteína adecuado. La difusión del Ag y del Ac permitirá que ambos se unan y reacciones entre sí formando un complejo Ag-Ac que se hará visible en forma de unos arcos de precipitación.

Materiales

• IgG
• Suero sanguíneo
• Albúmina
• Anticuerpos frente al suero
• Anticuerpos frente a la IgG
• Polvo de agarosa
• Tampón de electroforesis
• Papel de filtro
• Pajitas para perforar los pocillos
• Placas de petri
• Pipetas 
• Matraz

Procedimiento

1. Preparamos el tampón: 980 mL agua destilada + 20 mL contenido del bote de tampón
2. Preparamos la agarosa: 3 g agar + 200 mL tampón. Calentamos la mezcla a 100ºC en el microondas y cuando haya transparentado lo sacamos y lo metemos en baño maría hasta que alcance 60ºC.

3. Construimos un molde con una placa de petri y cuatro portaobjetos para los carriles. Echamos la agarosa en la bandeja molde y antes de que solidifique añadimos el molde para los carriles y lo dejamos solidificar. Una vez sólido el agar retiramos los moldes y hacemos los pocillos para las muestras.

4. Colocamos la bandeja con el gel en la cubeta de electroforesis y ponemos papel de filtro en cada uno de sus extremos de manera que sobresalga hacia el exterior. Esos papeles deben estar empapados en tampón. Vertemos tampón en cada uno de los vasos de la cubeta de electroforesis hasta llenarlos y asegurándonos que los extremos de los papeles están sumergidos en en tampón.

5. Dispensamos en los pocillos 20 microlitros de cada antígeno:

• en el de arriba -> IgG
• en el central -> Suero completo
• en el de abajo -> Albúmina

6. Cerramos la tapa de la cubeta y ponemos el voltaje a 125V durante 30 minutos. (IMPORTANTE: Cerca de la zona de aplicación polo negativo.)

7. Al acabar la electroforesis añadimos los anticuerpos. 60 microlitros en cada carril:

• carril de arriba: Ac Anti-IgG
• carril de abajo: Ac Antisuero

8. Tras 24-48 horas de difusión, serán visibles los arcos de precipitación en el gel.