Hemoglobina glicosilada (Hb A1c)

Significado clínico

La glucosa se une a la hemoglobina para formar la hemoglobina glicosilada. Esta unión se mantiene hasta que el glóbulo rojo es desechado, lo cual ocurre en aproximadamente 120 días. El examen de la hemoglobina glicosilada sirve para determinar como ha sido el control glucémico de una persona con diabetes en los últimos tres meses

Principio del método

Después de preparar un hemolizado, donde se elimina la fracción lábil, las hemoglobinas son retenidas por una resina de intercambio catiónico. La hemoglobina A1c se eluye de forma específica, previa eliminación por lavado de la hemoglobina A1a+b y se cuantifica por lectura fotométrica a 415 nm.

Materiales

• Tubos de ensayo.
• Pipetas + Prepipeta.
• Pipetas automáticas.
• Gradilla para tubos.
• Cubetas de espectrofotómetro.
• Gradilla para cubetas.
• Sangre.
• R1
• R2
• R3
• Microcolumnas.
• Espectrofotómetro.

Procedimiento

1. Preparamos el hemolizado añadiendo 50 microlitros de sange y 200 microlitros de R1. Se deja a temperatura ambiente 10-15 minutos antes de utilizarlo.

2. Le quitamos el tapón de la parte superior de la microcolumna y rompemos la lengüeta de la parte inferior. Con la parte lisa de una pipeta bajamos el disco hasta que quede pegado a la resina pero con cuidado para no desplazar la resina. Desechamos el líquido que hay en la microcolumna.

3. Pipeteamos 50 microlitros sobre el disco procurando que se extienda por toda la superficie del disco.

4. Una vez penetrado el hemolizado, pipeteamos 200 microlitros de R2 y desechamos el eluido.

5. Añadimos otros 2 mL de R2 y desechamos el eluido también.

6. Por último, añadimos 4 mL de R3 y esta vez recogemos el eluido. 

7. Preparamos la Hb total para medirla: 12 mL R3 + 50 microlitros hemolizado.

8. Ponemos en dos cubetas el eluido recogido en el paso 6 y la preparación del paso 7 y las medimos en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 415 nm.

Resultado

Hb Total: 0,586 A

Hb A1c: 0,651 A

(0,651/0,586)*(100/3)=37.03%