Extracción "casera" de ADN

Significado clínico

La extracción del ADN de las células donde se haya confinado es un paso previo en muchos procedimientos analíticos y diagnósticos.

Principio del método

La extracción del ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisas las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos celulares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN , de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol etílico.

Materiales

• Muestra vegetal
• Agua
• Sal de mesa
• Bicarbonato sódico
• Detergente líquido o champú
• Alcohol etílico frío
• Batidora
• Nevera
• Colador o centrífuga
• Vaso
• Tubo de ensayo
• Varilla fina

Procedimiento

1. Preparamos el tampón:

120 mL agua destilada + 1,5g sal de mesa + 5g bicarbonato sódico +5 mL detergente líquido

2. Cortar las verduras y triturarlas con un poco de agua en la batidora, accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos.

3. En un recipiente limpio mezclar 5 mL del triturado con 10 mL del tampón frío y agitar vigorosamente durante 2 minutos.

4. Separar los restos de verduras colando la muestra por unas gasas o por un colador muy fino.

5. Retirar 5 mL del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con una pipeta 10 mL de alcohol frío. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo este inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.

6. En un tubo de ensayo limpio echamos 2 mL de alcohol frío y con una pipeta Pasteur cogemos el ADN flotante y lo añadimos.

Resultados

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.