Glucosa-HK

Significado clínico

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo, la insulina facilita la entrada de glucosa en las células. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por déficit de insulina.

Principio del método

Materiales

• Tubos de ensayo.
• Cubetas de espectrofotómetro.
• Gradilla para tubos y para cubetas.
• Pipetas automáticas
• Reactivo de trabajo (RT)
• Patrón (GLUCOSE CAL) 100 mg/dL
• Muestra: suero o plasma.
• Espectrofotómetro.

Procedimiento

1. Pipetear en cada tubo:

Blanco -> 1 mL RT 

Patrón -> 1 mL RT + 1 mL Patrón

Muestra -> 1 mL RT + 10 microlitros muestra

2. Mezclamos e incubamos en baño maría a 37ºC durante 5 minutos.

3. Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 340 nm.

Resultados

Patrón: 0,314

Muestra: 0,340

Concentración de glucosa de la muestra = (0,340/0,314)*100 = 108,28 mg/dL

Proteinuria en sulfosalicílico

Significado clínico

Las proteínas normalmente no deben aparecer en orina, cuando esto sucede se denomina proteinuria. Puede ser causada por muchas condiciones. Algunas veces la causa no es dañina por ejemplo cuando no tomamos suficiente agua o ejercitamos más de lo habitual. Sin embargo, también puede ser un signo temprano de daño renal.

Principio del método

La adición de ácido sulfosalicílico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría.

Materiales

Materiales

• Tubos de ensayo.
• Pipetas automáticas.
• Cubetas de fotometría.
• Gradillas para tubos de ensayo y para cubetas.
• Suero salino fisiológico.
• Ácido sulfosalicílico al 3% (p/v).
• Patrón de proteínas.
• Orina de 24h.

Procedimiento

1. Preparar primero las disoluciones con las cuales vamos a trabajar para construir la curva de calibración:

D1= 0,2 mL patrón + 9,8 mL SSF -> 140 mg/dL

D2= 0,1 mL patrón + 9,9 mL SSF -> 70 mg/dL

D3= 0,05 mL patrón + 9,95 mL SSF -> 35 mg/dL

D4= 0,025 mL patrón + 9,975 mL SSF -> 17,5 mg/dL

2. Pipeteamos en cada tubo:

BR= 0,5 mL SSF + 2,0 mL Á. Sulfosalicílico

P1= 0,5 mL D1 + 2,0 mL Á. Sulfosalicílico

P2= 0,5 mL D2 + 2,0 mL Á. Sulfosalicílico

P3= 0,5 mL D3 + 2,0 mL Á. Sulfosalicílico

P4= 0,5 mL D4 + 2,0 mL Á. Sulfosalicílico

BM= 2,0 mL SSF +0,5 mL orina

PB= 0,5 mL orina + 2,0 mL Á. Sulfosalicílico

3. Agitamos los tubos por inversión, transferimos su contenido a cubetas de fotometría, seleccionamos la longitud de onda a 660 nm y procedemos a medir.

IMPORTANTE: Para medir los tubos P1, P2, P3 y P4 ajustamos el blanco con el BR y para medir el tubo PB ajustamos el blanco con el BM.

Resultados

P1= 1,600 A

P2= 1,198 A

P3= 0,207 A

P4= 0,197 A

PB= 1,076 A

La ecuación de la recta es y=0,0614x-0,0044.

Si sustituimos la absorbancia del problema podemos calcular la concentración:

x= 17,59 mg/dL

Cromatografía en capa fina

Significado clínico

Hay enfermedades clínicas en las que se produce una alta concentración de aminoácidos en el plasma y en la orina. Este desequilibrio en la sangre se denomina aminoaciduria. Algunas de estas enfermedades son: fenilcetonuria, cistinuria o la enfermedad de Hartnup.

Principio del método

Uno de los análisis empleados para la detección de aminoácidos en una muestra biológica es la cromatografía de capa fina. Es una técnica de separación e identificación de sustancias químicas disueltas en un disolvente (fase móvil) que se mueve sobre una capa delgada de un adsorbente idóneo (fase estacionaria).

Materiales

Preparación del patrón

• Láminas de gel de celulosa.
• Disolvente de cromatografía.
• Disolución reveladora: Ninhidrina en acetona al 0,2% (p/v).
• Muestra problema de aminoácidos.
• Muestra patrón de aminoácidos: triptófano, alanina, valina y arginina.
• Cubeta o tarro de cristal.
• Micropipeta.

Materiales

Procedimiento

1. Tomamos una placa de 10x5 cm y marcamos a 1,5 cm una línea con lápiz. A continuación hacemos varios puntos correspondiente a los dos aminoácidos y otro punto para el patrón. IMPORTANTE: manipular con cuidado y con guantes, ya que la piel tiene aminoácidos y podríamos manchar la placa.

2. Con la placa en horizontal aplicamos 2 microlitros de cada muestra y patrón en sus puntos correspondientes.

3. Añadimos la parte móvil en un recipiente sin que llegue a la línea de puntos. 

4. Una vez secada la muestra introducimos la placa de forma vertical en un recipiente. Los puntos de aplicación de la muestra deben quedar en la base.

5. Esperamos que la parte móvil suba por capilaridad por la placa hasta 2 cm de la parte superior. Marcamos con un lápiz hasta donde ha subido y metemos la placa en la estufa para que se seque rápidamente.

6. A continuación pulverizamos la disolución reveladora sujetando la placa en posición vertical. La pulverización debe hacerse suave y uniformemente. Debe hacerse en una campana extractora o cerca de una ventana porque debe evitarse la inhalación del pulverizado.

7. Calentamos las pacas 2 minutos en la estufa a 105ºC y observamos las manchas de aminoácidos que aparecerán distribuidas a lo largo del gel.

Resultados

La relación al frente del solvente (Rf) va a ser constante y por tanto nos permite, mediante la comparación con patrones, la identificación de la sustancia en una mezcla.

Rf (M1)= 3cm/5cm= 0,60 -> Esta Rf se corresponde con el aminoácido VALINA.

Rf(M2)= 4,2 cm/5cm= 0,84 -> Esta Rf se corresponde con el aminoácido TRIPTÓFANO.

Determinación de la glucosa por el método Trinder

Significado clínico

La glucosa es la mayor fuente de energía de las células. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con hiperglucemia, causada por un déficit de insulina.

Principio del método

La intensidad de color es proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.

Materiales

Material

- Pipetas (automáticas y manuales)

- Tubos de ensayo de 3 mL

- Gradillas

- Puntas de pipeta

- Cubetas para espectrofotómetro

- Espectofotómetro

- Baño maría

- Reactivo de trabajo: Tampón + Enzimas

- GLUCOSE CAL 100mg/dL

Calibrador

Reactivo de trabajo

Procedimiento

- Preparar los tubos:

Tubo 1 (Blanco): 1 mL RT 

Tubo 2 (Patrón): 1 mL RT + 10 uL patrón

Tubo 2 (Muestra): 1 mL RT + 10 uL suero problema

- Mezclar los tubos e incubar en el baño maría a 37ºC durante 10 minutos.

- Poner el contenido de los tubos en las cubetas del espectrofotómetro y medir a 505 nm.

(Nota: El color es estable durante 30 minutos. La ausencia de color es indicativo de error.)

Resultados

Patrón: 0,503 A

Muestra: 0,470 A

(0,470/0,503) x 100 = 93,44 mg/dL

El margen de error de la concentración del suero problema se haya entre 77 mg/dL y 107 mg/dL, siendo el valor exacto del mismo 92 mg/dL.

Medición de la glucosuria

Significado clínico

La glucosuria es la presencia de glucosa en la orina a niveles elevados. La glucosa se reabsorbe en su totalidad a nivel de las nefronas, las unidades funcionales del riñón donde se produce la depuración de la sangre. Sin embargo, cuando los niveles de glucosa en sangre rebasan un umbral, una cifra alrededor de los 180 mg/dl de glicemia, la nefrona permite que se elimine glucosa por la orina para compensar la sobrecarga de glicemia que no es compensada por la insulina.

Principio del método

Las tiras de orina consisten básicamente en una lámina opaca semirrígida que sirve de capa soporte a la capa reactiva, formada por una matriz impregnada de los reactivos pertinentes. Es introducida en un lector de tiras que es un aparato basado en la medida de la intensidad de la luz reflejada por una fase sólida (en la que coinciden reactivos y analito) que es iluminada por un haz luminoso cuya longitud de onda resulta absorbida o dispersada por el producto resultante de la reacción. Este aparato se encarga de cuantificar esa luz reflejada.

Materiales

• Tiras reactivas
• Lector de tiras.
• Orina

Procedimiento


1. Encendemos el lector de tiras.
2. Tocamos la pantalla para que salga el vástago.
3. Introducimos tira en el bote de orina de manera que todos los cuadros queden sumergidos.
4. Depositamos la tira en papel para limpiar de manera lateral para quitar el exceso de orina
5. Ponemos la tira en el vástago y esperamos el resultado.




Lectura de resultados

 

Medición de la glucemia capilar con el glucómetro

Significado clínico

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo, la insulina facilita la entrada de glucosa en las células. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia, causada por déficit de insulina.

Principio del método

La mayoría de los glucómetros en la actualidad realizan esta lectura a través de la reacción una enzima que se llama glucosa oxidasa que se encuentra en las tiras reactivas que provoca la oxidación de la glucosa. Una vez que se ha dado la oxidación de la glucosa, se pasa una corriente eléctrica a través de la tira, la cantidad de corriente que pase será proporcional a la concentración de glucosa en la sangre y a continuación se muestra en pantalla el resultado.

Materiales

• Gasas
• Alcohol
• Lancetas
• Tiras para glucómetro
• Glucómetro 

Procedimiento

1. Ponemos el chip del lote de tiras.
2. Encendemos el glucómetro y comprobamos que el número que hay en la pantalla coincide con el número del bote de tiras. Si no es así, no podemos usar esas tiras porque darían resultados erróneos.
3. Desinfectamos la zona que vamos a pinchar para obtener la gota de sangre capilar.
4. Introducimos la tira en el aparato.
5. Pinchamos la zona desinfectada y presionamos por los bordes para que salga una gota de sangre.
6. Depositamos la gota en la zona amarilla de la tira.
7. Leemos el resultado.

Resultados

Los valores normales de glucosa capilar después de dos horas de comer oscilan entre 80 y 180 mg/dL.
Es decir que el valor obtenido es un valor dentro del rango normal.

Mi resultado

Construcción de una curva de calibración

Materiales

• Matraz Erlenmeyer (cromógeno 1), []=800 mg/dL
• Matraz Erlenmeyer (cromógeno 2), []=600 mg/dL
• Agua destilada
• Pipetas manuales, prepipetas
• Tubos de ensayo
• Cubetas de espectrofotometría
• Gradillas metálicas y para cubetas
• Espectrofotómetro de absorción

Batería de diluciones:

CROMÓGENO 1:
Tubo 1 (1/1)= 800 mg/dL
Tubo 2 (1/2)= 400 mg/dL
Tubo 3 (1/4)= 200 mg/dL
Tubo 4 (1/8)= 100 mg/dL
Tubo 5 (1/16)= 50 mg/dL

CROMÓGENO 2:
Tubo 1 (1/1)= 600 mg/dL
Tubo 2 (1/3)= 200 mg/dL
Tubo 3 (1/9)= 66,7 mg/dL
Tubo 4 (1/27)= 22,2 mg/dL

Procedimiento

1. Para preparar la primera batería echamos 4 mL de agua en todos los tubos menos en el primero. Tras eso echamos 4 mL de soluto en el tubo 1 y 4 en el tubo 2. Del tubo 2 cogemos 4 mL y los echamos al tubo 3, del tubo 3 al 4 otros 4 mL y del tubo 4 cogemos 4 mL y los echamos al tubo 5 y desechamos 4 mL para que en todos los tubos quede la misma cantidad.

2. Para preparar la segunda batería echamos 3 mL de agua en todos los tubos menos en el primero. Tras eso echamos 3 mL de soluto en el tubo 1 y 1,5 en el tubo 2. Del tubo 2 cogemos 1.5 mL y los llevamos al tubo 3 y del tubo 3 retiramos 1,5 mL y los vertimos al tubo 4, tras lo cual desechamos 1,5 mL para que quede la misma cantidad en los 4 tubos.

3. Llenamos las cubetas con las diluciones y las llevamos a medir.

4. Primero establecemos la longitud de onda a la que vamos a medir. En el cromógeno 1 la longitud de onda a la que debemos medir es de 590 nm. Establecemos el blanco con agua destilada y procedemos a medir y repetimos el proceso con el cromógeno 2 a una longitud de onda de 500 nm

Resultados

Cromógeno 1
Tubo 1: 0,443 A
Tubo 2: 0,204 A
Tubo 3: 0,109 A
Tubo 4: 0,053 A
Tubo 5: 0,017 A

Cromógeno 2
Tubo 1: 0,064 A
Tubo 2: 0,035 A
Tubo 3: 0,024 A
Tubo 4: 0,004 A

Dilución 1: 0,125 A
0,125 = 0.0006x-0,008; x = 221,67 mg/dL

Dilución 2: 0,081 A
0,081 = 0,00009x+0.012; x = 766,67 mg/dL