Construcción de una curva de calibración

Materiales

• Matraz Erlenmeyer (cromógeno 1), []=800 mg/dL
• Matraz Erlenmeyer (cromógeno 2), []=600 mg/dL
• Agua destilada
• Pipetas manuales, prepipetas
• Tubos de ensayo
• Cubetas de espectrofotometría
• Gradillas metálicas y para cubetas
• Espectrofotómetro de absorción

Batería de diluciones:

CROMÓGENO 1:
Tubo 1 (1/1)= 800 mg/dL
Tubo 2 (1/2)= 400 mg/dL
Tubo 3 (1/4)= 200 mg/dL
Tubo 4 (1/8)= 100 mg/dL
Tubo 5 (1/16)= 50 mg/dL

CROMÓGENO 2:
Tubo 1 (1/1)= 600 mg/dL
Tubo 2 (1/3)= 200 mg/dL
Tubo 3 (1/9)= 66,7 mg/dL
Tubo 4 (1/27)= 22,2 mg/dL

Procedimiento

1. Para preparar la primera batería echamos 4 mL de agua en todos los tubos menos en el primero. Tras eso echamos 4 mL de soluto en el tubo 1 y 4 en el tubo 2. Del tubo 2 cogemos 4 mL y los echamos al tubo 3, del tubo 3 al 4 otros 4 mL y del tubo 4 cogemos 4 mL y los echamos al tubo 5 y desechamos 4 mL para que en todos los tubos quede la misma cantidad.

2. Para preparar la segunda batería echamos 3 mL de agua en todos los tubos menos en el primero. Tras eso echamos 3 mL de soluto en el tubo 1 y 1,5 en el tubo 2. Del tubo 2 cogemos 1.5 mL y los llevamos al tubo 3 y del tubo 3 retiramos 1,5 mL y los vertimos al tubo 4, tras lo cual desechamos 1,5 mL para que quede la misma cantidad en los 4 tubos.

3. Llenamos las cubetas con las diluciones y las llevamos a medir.

4. Primero establecemos la longitud de onda a la que vamos a medir. En el cromógeno 1 la longitud de onda a la que debemos medir es de 590 nm. Establecemos el blanco con agua destilada y procedemos a medir y repetimos el proceso con el cromógeno 2 a una longitud de onda de 500 nm

Resultados

Cromógeno 1
Tubo 1: 0,443 A
Tubo 2: 0,204 A
Tubo 3: 0,109 A
Tubo 4: 0,053 A
Tubo 5: 0,017 A

Cromógeno 2
Tubo 1: 0,064 A
Tubo 2: 0,035 A
Tubo 3: 0,024 A
Tubo 4: 0,004 A

Dilución 1: 0,125 A
0,125 = 0.0006x-0,008; x = 221,67 mg/dL

Dilución 2: 0,081 A
0,081 = 0,00009x+0.012; x = 766,67 mg/dL